{"id":8950,"date":"2015-05-11T20:13:19","date_gmt":"2015-05-11T18:13:19","guid":{"rendered":"http:\/\/www.bmscience.net\/blog\/?p=8950"},"modified":"2024-03-08T21:23:59","modified_gmt":"2024-03-08T20:23:59","slug":"relazione-sulla-colorazione-di-gram-e-osservazione-di-vetrino","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/bmscience.net\/blog\/relazione-sulla-colorazione-di-gram-e-osservazione-di-vetrino\/","title":{"rendered":"Relazione sulla colorazione di Gram e osservazione di vetrino"},"content":{"rendered":"\n<div id=\"ez-toc-container\" class=\"ez-toc-v2_0_83 counter-hierarchy ez-toc-counter ez-toc-custom ez-toc-container-direction\">\n<div class=\"ez-toc-title-container\">\n<p class=\"ez-toc-title ez-toc-toggle\" style=\"cursor:pointer\">Indice<\/p>\n<span class=\"ez-toc-title-toggle\"><a href=\"#\" class=\"ez-toc-pull-right ez-toc-btn ez-toc-btn-xs ez-toc-btn-default ez-toc-toggle\" aria-label=\"Toggle Table of Content\"><span class=\"ez-toc-js-icon-con\"><span class=\"\"><span class=\"eztoc-hide\" style=\"display:none;\">Toggle<\/span><span class=\"ez-toc-icon-toggle-span\"><svg style=\"fill: #222222;color:#222222\" xmlns=\"http:\/\/www.w3.org\/2000\/svg\" class=\"list-377408\" width=\"20px\" height=\"20px\" viewBox=\"0 0 24 24\" fill=\"none\"><path d=\"M6 6H4v2h2V6zm14 0H8v2h12V6zM4 11h2v2H4v-2zm16 0H8v2h12v-2zM4 16h2v2H4v-2zm16 0H8v2h12v-2z\" fill=\"currentColor\"><\/path><\/svg><svg style=\"fill: #222222;color:#222222\" class=\"arrow-unsorted-368013\" xmlns=\"http:\/\/www.w3.org\/2000\/svg\" width=\"10px\" height=\"10px\" viewBox=\"0 0 24 24\" version=\"1.2\" baseProfile=\"tiny\"><path d=\"M18.2 9.3l-6.2-6.3-6.2 6.3c-.2.2-.3.4-.3.7s.1.5.3.7c.2.2.4.3.7.3h11c.3 0 .5-.1.7-.3.2-.2.3-.5.3-.7s-.1-.5-.3-.7zM5.8 14.7l6.2 6.3 6.2-6.3c.2-.2.3-.5.3-.7s-.1-.5-.3-.7c-.2-.2-.4-.3-.7-.3h-11c-.3 0-.5.1-.7.3-.2.2-.3.5-.3.7s.1.5.3.7z\"\/><\/svg><\/span><\/span><\/span><\/a><\/span><\/div>\n<nav><ul class='ez-toc-list ez-toc-list-level-1 eztoc-toggle-hide-by-default' ><li class='ez-toc-page-1 ez-toc-heading-level-2'><a class=\"ez-toc-link ez-toc-heading-1\" href=\"https:\/\/bmscience.net\/blog\/relazione-sulla-colorazione-di-gram-e-osservazione-di-vetrino\/#TITOLO_Colorazione_di_Gram\" >TITOLO: Colorazione di Gram<\/a><\/li><li class='ez-toc-page-1 ez-toc-heading-level-2'><a class=\"ez-toc-link ez-toc-heading-2\" href=\"https:\/\/bmscience.net\/blog\/relazione-sulla-colorazione-di-gram-e-osservazione-di-vetrino\/#STRUMENTI\" >STRUMENTI:<\/a><\/li><li class='ez-toc-page-1 ez-toc-heading-level-2'><a class=\"ez-toc-link ez-toc-heading-3\" href=\"https:\/\/bmscience.net\/blog\/relazione-sulla-colorazione-di-gram-e-osservazione-di-vetrino\/#MATERIALI_BIOLOGICI\" >MATERIALI BIOLOGICI:<\/a><\/li><li class='ez-toc-page-1 ez-toc-heading-level-2'><a class=\"ez-toc-link ez-toc-heading-4\" href=\"https:\/\/bmscience.net\/blog\/relazione-sulla-colorazione-di-gram-e-osservazione-di-vetrino\/#VETRERIA\" >VETRERIA:<\/a><\/li><li class='ez-toc-page-1 ez-toc-heading-level-2'><a class=\"ez-toc-link ez-toc-heading-5\" href=\"https:\/\/bmscience.net\/blog\/relazione-sulla-colorazione-di-gram-e-osservazione-di-vetrino\/#MATERIALI_CHIMICI\" >MATERIALI CHIMICI:<\/a><\/li><li class='ez-toc-page-1 ez-toc-heading-level-2'><a class=\"ez-toc-link ez-toc-heading-6\" href=\"https:\/\/bmscience.net\/blog\/relazione-sulla-colorazione-di-gram-e-osservazione-di-vetrino\/#DPI_DA_UTILIZZARE\" >DPI DA UTILIZZARE:<\/a><\/li><li class='ez-toc-page-1 ez-toc-heading-level-2'><a class=\"ez-toc-link ez-toc-heading-7\" href=\"https:\/\/bmscience.net\/blog\/relazione-sulla-colorazione-di-gram-e-osservazione-di-vetrino\/#RELAZIONE\" >RELAZIONE:<\/a><ul class='ez-toc-list-level-3' ><li class='ez-toc-heading-level-3'><a class=\"ez-toc-link ez-toc-heading-8\" href=\"https:\/\/bmscience.net\/blog\/relazione-sulla-colorazione-di-gram-e-osservazione-di-vetrino\/#PROCEDIMENTO\" >PROCEDIMENTO:<\/a><\/li><li class='ez-toc-page-1 ez-toc-heading-level-3'><a class=\"ez-toc-link ez-toc-heading-9\" href=\"https:\/\/bmscience.net\/blog\/relazione-sulla-colorazione-di-gram-e-osservazione-di-vetrino\/#POSSIBILI_ERRORI\" >POSSIBILI ERRORI:<\/a><\/li><li class='ez-toc-page-1 ez-toc-heading-level-3'><a class=\"ez-toc-link ez-toc-heading-10\" href=\"https:\/\/bmscience.net\/blog\/relazione-sulla-colorazione-di-gram-e-osservazione-di-vetrino\/#OSSERVAZIONI\" >OSSERVAZIONI:<\/a><\/li><li class='ez-toc-page-1 ez-toc-heading-level-3'><a class=\"ez-toc-link ez-toc-heading-11\" href=\"https:\/\/bmscience.net\/blog\/relazione-sulla-colorazione-di-gram-e-osservazione-di-vetrino\/#CONCLUSIONI\" >CONCLUSIONI:<\/a><\/li><\/ul><\/li><\/ul><\/nav><\/div>\n<h2 class=\"wp-block-heading\"><span class=\"ez-toc-section\" id=\"TITOLO_Colorazione_di_Gram\"><\/span><strong>TITOLO: Colorazione di Gram<\/strong><span class=\"ez-toc-section-end\"><\/span><\/h2>\n\n\n\n<p><strong>OBIETTIVO: <\/strong>Colorazione di gram di un ceppo di fermenti lattici e osservazione microscopica.<\/p>\n\n\n\n<h2 class=\"wp-block-heading\"><span class=\"ez-toc-section\" id=\"STRUMENTI\"><\/span>STRUMENTI:<span class=\"ez-toc-section-end\"><\/span><\/h2>\n\n\n\n<ul class=\"wp-block-list\">\n<li>Bunsen, Microscopio Ottico;<\/li>\n<\/ul>\n\n\n\n<h2 class=\"wp-block-heading\"><span class=\"ez-toc-section\" id=\"MATERIALI_BIOLOGICI\"><\/span>MATERIALI BIOLOGICI:<span class=\"ez-toc-section-end\"><\/span><\/h2>\n\n\n\n<ul class=\"wp-block-list\">\n<li>Piastra Petri PCA con Fermenti lattici;<\/li>\n<\/ul>\n\n\n\n<h2 class=\"wp-block-heading\"><span class=\"ez-toc-section\" id=\"VETRERIA\"><\/span>VETRERIA:<span class=\"ez-toc-section-end\"><\/span><\/h2>\n\n\n\n<ul class=\"wp-block-list\">\n<li>Vetrino portaoggetti,&nbsp;Ansa monouso sterile,&nbsp;Vaschetta per colorazione,&nbsp;Pinze in legno;<\/li>\n<\/ul>\n\n\n\n<h2 class=\"wp-block-heading\"><span class=\"ez-toc-section\" id=\"MATERIALI_CHIMICI\"><\/span>MATERIALI CHIMICI:<span class=\"ez-toc-section-end\"><\/span><\/h2>\n\n\n\n<ul class=\"wp-block-list\">\n<li>Olio per immersione, Spruzzetta con H<sub>2<\/sub>O, Kit per la colorazione di gram (Cristal Violetto, Liquido di Lugol, Decolorante, Safranina);<\/li>\n<\/ul>\n\n\n\n<h2 class=\"wp-block-heading\"><span class=\"ez-toc-section\" id=\"DPI_DA_UTILIZZARE\"><\/span>DPI DA UTILIZZARE:<span class=\"ez-toc-section-end\"><\/span><\/h2>\n\n\n\n<ul class=\"wp-block-list\">\n<li>Camice, Guanti in lattice;<\/li>\n<\/ul>\n\n\n<div id=\"bmscience3258650590\" style=\"margin-top: 15px;margin-bottom: 15px;margin-left: auto;margin-right: auto;text-align: center;\"><a href=\"https:\/\/amzn.to\/4kYOe6d\" target=\"_blank\" aria-label=\"GS_Header_IT_Desktop\"><img decoding=\"async\" src=\"https:\/\/bmscience.net\/blog\/wp-content\/uploads\/2025\/06\/GS_Header_IT_Desktop.png\" alt=\"\"   style=\"display: inline-block;\" \/><\/a><\/div>\n\n\n<h2 class=\"wp-block-heading\"><span class=\"ez-toc-section\" id=\"RELAZIONE\"><\/span><strong>RELAZIONE:<\/strong><span class=\"ez-toc-section-end\"><\/span><\/h2>\n\n\n\n<h3 class=\"wp-block-heading\"><span class=\"ez-toc-section\" id=\"PROCEDIMENTO\"><\/span><strong>PROCEDIMENTO:<\/strong><span class=\"ez-toc-section-end\"><\/span><\/h3>\n\n\n<div class=\"wp-block-image\">\n<figure class=\"alignright size-full is-resized\"><img loading=\"lazy\" decoding=\"async\" width=\"474\" height=\"321\" src=\"https:\/\/www.bmscience.net\/blog\/wp-content\/uploads\/2024\/03\/OIP.jpeg\" alt=\"\" class=\"wp-image-19920\" style=\"width:346px;height:auto\" srcset=\"https:\/\/bmscience.net\/blog\/wp-content\/uploads\/2024\/03\/OIP.jpeg 474w, https:\/\/bmscience.net\/blog\/wp-content\/uploads\/2024\/03\/OIP-300x203.jpeg 300w\" sizes=\"auto, (max-width: 474px) 100vw, 474px\" \/><figcaption class=\"wp-element-caption\">Vaschetta utilizzata per i vari procedimenti.<br>Credit: Raffaele Cocomazzi (<a href=\"http:\/\/www.bmscience.net\">www.bmscience.net<\/a>)<\/figcaption><\/figure>\n<\/div>\n\n\n<p class=\"has-text-align-left\">La prova consiste nel colorare un ceppo batterico tramite la <strong>colorazione di gram<\/strong> per poi poterlo osservare al microscopio ottico con l\u2019obiettivo ad immersione. Per colorare e il preparato a secco bisogna:<\/p>\n\n\n\n<ol class=\"wp-block-list\">\n<li>Prelevare con un\u2019ansa sterile una colonia batterica da una piastra precedentemente seminata e distribuire l\u2019inoculo su un vetrino portaoggetti dove \u00e8 stata posizionata una goccia di acqua distillata;<\/li>\n\n\n\n<li>Si stempera bene l\u2019inoculo all\u2019interno della goccia e sulla parte centrale del vetrino in modo da distribuire bene le singole cellule;<\/li>\n\n\n\n<li>Si lascia asciugare il vetrino aiutandosi con il bunsen e con una pinza in legno fino a quando non evapora tutta l\u2019acqua. Il calore della fiamma far\u00e0 s\u00ec che il campione si fissi sul vetrino;<\/li>\n\n\n\n<li>Dopo la fissazione si pone il vetrino sulla vaschetta in modo tale che esso rimanga in posizione orizzontale;<\/li>\n\n\n\n<li>Si aggiunge il primo colorante sul vetrino e lo si lascia agire per un minuto. Il primo colorante \u00e8 il <strong>cristal violetto<\/strong> che colora di viola;<\/li>\n\n\n\n<li>Dopo un minuto si elimina l\u2019eccesso di cristal violetto con una spruzzetta con acqua distillata e si aggiunge il <strong>liquido di Lugol<\/strong> (soluzione iodo-iodurata) per un minuto che ha la funzione mordenzante di fissare il cristal violetto ai componenti cellulari acidi e colora tutte le cellule;<\/li>\n\n\n\n<li>La fase successiva \u00e8 la decolorazione che consiste nell\u2019aggiunta di una miscela 50% alcool e 50% acido acetico. Essa la si lascia applicare per 30-60 secondi fino a che il preparato non lascia pi\u00f9 il colore. Il <strong>decolorante<\/strong> decolora solo i batteri Gram-, mentre i Gram+ resistono all\u2019azione del solvente e rimangono viola. Questo comportamento \u00e8 dovuto al differente spessore dello strato di peptidoglicano; <\/li>\n<\/ol>\n\n\n<div class=\"wp-block-image\">\n<figure class=\"alignright size-full is-resized\"><img loading=\"lazy\" decoding=\"async\" width=\"474\" height=\"567\" src=\"https:\/\/www.bmscience.net\/blog\/wp-content\/uploads\/2015\/05\/OIP-1.jpeg\" alt=\"\" class=\"wp-image-19921\" style=\"width:232px;height:auto\" srcset=\"https:\/\/bmscience.net\/blog\/wp-content\/uploads\/2015\/05\/OIP-1.jpeg 474w, https:\/\/bmscience.net\/blog\/wp-content\/uploads\/2015\/05\/OIP-1-251x300.jpeg 251w\" sizes=\"auto, (max-width: 474px) 100vw, 474px\" \/><figcaption class=\"wp-element-caption\">Essiccamento del vetrino.<br>Credit: Raffaele Cocomazzi (<a href=\"http:\/\/www.bmscience.net\">www.bmscience.net<\/a>)<\/figcaption><\/figure>\n<\/div>\n\n\n<ol class=\"wp-block-list\" start=\"8\">\n<li>Dopo la decolorazione si risciacqua il vetrino con l\u2019acqua distillata e si aggiunge il secondo colorante lasciandolo agire per un minuto. Il secondo colorante \u00e8 la\u00a0<strong>safranina<\/strong>\u00a0che si lega ai componenti acidi dei Gram- e li colora in rosso o fucsia, mentre non si possono legare ai Gram+ perch\u00e9 ormai sono impegnati nel legame con il complesso cristal violetto-iodio che restano viola;<\/li>\n\n\n\n<li>Ancora una volta si sciacqua il vetrino con H<sub>2<\/sub>O per eliminare l\u2019eccesso di safranina e si porta ad asciugare sul bunsen.<\/li>\n<\/ol>\n\n\n\n<p>Al termine di queste operazioni si avr\u00e0 il preparato a fresco pronto per essere osservato al microscopio:<\/p>\n\n\n\n<ol class=\"wp-block-list\" start=\"10\">\n<li>Si inizia l\u2019osservazione con l\u2019obiettivo 40x in modo da individuare cellule batteriche separate e non quelle ammassate;<\/li>\n\n\n\n<li>Una volta scelto il punto migliore, si abbassa il tavolino portaoggetti e si inserisce una goccia di olio per immersione nel punto desiderato e si passa all\u2019osservazione con l\u2019obiettivo 100x;<\/li>\n\n\n\n<li>Si fa una distinzione dei tipi di batteri osservati se sono gram+, gram-, bacilli o cocchi.<\/li>\n<\/ol>\n\n\n<div id=\"bmscience1691380609\" style=\"margin-left: auto;margin-right: auto;text-align: center;\"><div data-id='24153' class='amazon-auto-links aal-js-loading'><p class='now-loading-placeholder'>Caricamento&#8230;<\/p><\/div>\r\n\r\n<\/div>\n\n\n<h3 class=\"wp-block-heading\"><span class=\"ez-toc-section\" id=\"POSSIBILI_ERRORI\"><\/span><strong>POSSIBILI ERRORI:<\/strong><span class=\"ez-toc-section-end\"><\/span><\/h3>\n\n\n<div class=\"wp-block-image\">\n<figure class=\"alignright size-full is-resized\"><img loading=\"lazy\" decoding=\"async\" width=\"258\" height=\"322\" src=\"https:\/\/www.bmscience.net\/blog\/wp-content\/uploads\/2024\/03\/OIP-2.jpeg\" alt=\"\" class=\"wp-image-19922\" style=\"width:217px;height:auto\" srcset=\"https:\/\/bmscience.net\/blog\/wp-content\/uploads\/2024\/03\/OIP-2.jpeg 258w, https:\/\/bmscience.net\/blog\/wp-content\/uploads\/2024\/03\/OIP-2-240x300.jpeg 240w\" sizes=\"auto, (max-width: 258px) 100vw, 258px\" \/><figcaption class=\"wp-element-caption\">Credit: Raffaele Cocomazzi (<a href=\"http:\/\/www.bmscience.net\">www.bmscience.net<\/a>)<\/figcaption><\/figure>\n<\/div>\n\n\n<p class=\"has-text-align-left\">L\u2019<strong>identificazione batterica<\/strong> \u00e8 una procedura molto delicata e gli errori da valutare possono essere tanti. Un errore possibile pu\u00f2 avvenire durante la fase di <strong>decolorazione<\/strong> che \u00e8 una fase critica perch\u00e9 un eccessiva durata fa s\u00ec che i Gram+ appaiano come Gram-, mentre una decolorazione ridotta non permette l\u2019estrazione completa del complesso cristal violetto-iodio e fa apparire i Gram- come Gram+; inoltre vanno utilizzate <strong>colture fresche<\/strong> di 24 ore circa poich\u00e9 le cellule vecchie, soprattutto quelle dei Gram+, tendono a perdere la capacit\u00e0 di trattenere il primo colorante per cui nello striscio si possono osservare reazioni variabili con alcune cellule colorate in viola e altre in rosso. Tuttavia l\u2019errore pi\u00f9 facile da commettere \u00e8 quello di <strong>contaminare<\/strong> il vetrino. La contaminazione pu\u00f2 avvenire anche nei passaggi precedenti, durante la semina della coltura.<\/p>\n\n\n\n<h3 class=\"wp-block-heading\"><span class=\"ez-toc-section\" id=\"OSSERVAZIONI\"><\/span><strong>OSSERVAZIONI:<\/strong><span class=\"ez-toc-section-end\"><\/span><\/h3>\n\n\n\n<p class=\"has-text-align-left\">I batteri che ci dovremmo aspettare dall\u2019osservazione dovrebbero essere tutti <strong>lactobacilli gram+<\/strong> perch\u00e9 nella coltura in piastra sono stati inseriti i seguenti batteri: <em>Lactobacillus rhamnosus,<\/em> <em>Lactobacillus paracasei, Lactobacillus acidophilus <\/em>e<em> Bifidobacterium bifidum<\/em>.<\/p>\n\n\n\n<p class=\"has-text-align-left\">Dalle osservazioni microscopiche si pu\u00f2 capire di come il vetrino sia stato contaminato infatti sono presenti diverse specie:<\/p>\n\n\n<div class=\"wp-block-image\">\n<figure class=\"aligncenter size-full is-resized\"><img loading=\"lazy\" decoding=\"async\" width=\"573\" height=\"460\" src=\"https:\/\/www.bmscience.net\/blog\/wp-content\/uploads\/2015\/05\/11261077_10204554498690063_1483906108_n-1.jpg\" alt=\"\" class=\"wp-image-19923\" style=\"width:609px;height:auto\" srcset=\"https:\/\/bmscience.net\/blog\/wp-content\/uploads\/2015\/05\/11261077_10204554498690063_1483906108_n-1.jpg 573w, https:\/\/bmscience.net\/blog\/wp-content\/uploads\/2015\/05\/11261077_10204554498690063_1483906108_n-1-300x241.jpg 300w\" sizes=\"auto, (max-width: 573px) 100vw, 573px\" \/><figcaption class=\"wp-element-caption\">In questa immagine si possono notare la presenza di <strong>lactobacilli<\/strong>, essi si riconoscono per il loro colore violetto (gram+) e per la loro forma di bacillo in catena; questo \u00e8 l\u2019unico tipo di batteri che ci saremmo dovuti aspettare, tuttavia sono presenti anche dei cocchi che non dovrebbero esserci. <br>Credit: Raffaele Cocomazzi\u00a0(<a href=\"http:\/\/www.bmscience.net\">www.bmscience.net<\/a>)<\/figcaption><\/figure>\n<\/div>\n\n\n<h3 class=\"wp-block-heading\"><span class=\"ez-toc-section\" id=\"CONCLUSIONI\"><\/span><strong>CONCLUSIONI:<\/strong><span class=\"ez-toc-section-end\"><\/span><\/h3>\n\n\n\n<p class=\"has-text-align-left\">Dalla colorazione e dall\u2019osservazione microscopica si pu\u00f2 comprendere uno degli ultimi passaggi dell\u2019identificazione batterica, quella che consente di colorare e osservare la forme e la disposizione delle cellule oltre che di classificare i batteri in Gram- e Gram+. La prova di per s\u00e9 non \u00e8 complessa, ma bisogna fare molta attenzione nell\u2019eseguire i vari passaggi per evitare la contaminazione come \u00e8 avvenuta nel mio caso.<\/p>\n\n\n<div id=\"bmscience4254392096\" style=\"margin-top: 15px;margin-bottom: 15px;margin-left: auto;margin-right: auto;text-align: center;\"><a href=\"https:\/\/amzn.to\/4l5awDk\" target=\"_blank\" aria-label=\"ezgif-274b711575da66\"><img loading=\"lazy\" decoding=\"async\" src=\"https:\/\/bmscience.net\/blog\/wp-content\/uploads\/2025\/06\/ezgif-274b711575da66.gif\" alt=\"\"  width=\"800\" height=\"160\"  style=\"display: inline-block;\" \/><\/a><\/div>","protected":false},"excerpt":{"rendered":"<p>TITOLO: Colorazione di Gram OBIETTIVO: Colorazione di gram di un ceppo di fermenti lattici e osservazione microscopica. 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